求助！WB条带不清楚

小弟做western blot有段时间了， 最近做小鼠DC细胞 A20的干扰，结果western blot不知怎么了， 第一次做的时候能用抗体砸的出来，但后面重复的时候却总是跑得很脏，条带不清。
请教各位大神，不知是否有遇到这样的情况？还请各位不吝赐教！谢谢啦
PS：1.中间变化的条件主要是转膜条件由100A 50mins 换到100v 60mins，有可能因为转过了么？（100A 50mins 最上2条条带没完全转过来）
       2. 由于怀疑是wb中涉及buffer的原因（图2），做过dot plot检验试剂，的确实用的RIPA buffer对抗体有反应， 所以后面用重新配制过，结果还是一样（图三，下面一道为beta-actin，上面模糊的就是我要的条带）
       3. A20大约分子量90kd， 但是砸出来的大概只有80kd，这样应该还正常吧？
       4. 为了得到条带，最近增长曝光时间，结果发现在用A20抗体的时候直接砸出了一条大概30+kd的条带 图4（曝光直接先出来的）
       5. 有可能是蛋白降解么？ 但是如果是蛋白降解 beta-actin条带也还是很清晰；gel也同时跑了平行样，烤蓝对照排除gel的问题


第一次跑的条带



图2 后面跑的条带 第一道为loding buffer 第二道为marker



图3



图4  

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